期刊简介
《中国骨与关节杂志》基本情况介绍《中国骨与关节杂志》由国家卫生和计划生育委员会主管，中国医疗保健国际交流促进会、北京中科康辰骨关节伤病研究所主办，解放军总医院第一附属医院(304 医院全军骨科研究所)承办，目前已被中国科技论文统计源期刊 ( 中国科技核心期刊 )、美国化学文摘数据库收录。本刊以广大骨与关节疾病临床和基础研究工作者为读者对象。内容涵盖骨与关节疾病流行病学、诊断、药物治疗、手术治疗、骨科康复、骨科影像学及相关基础研究。本刊每期设一个重点号，报道国内外最新学术动态、临床诊治经验和基础科研成果。常设栏目有：述评、专论、论著、专题讲座、综述、临床研究与实践、骨科教案、标准·方案·指南、指南解读、读者• 作者• 编者、专家点评、病例报告等。本刊采用在线审编系统，不接受纸质投稿。投稿请登录《中国骨与关节杂志》网站 ( http://www.cjb304.com ) 进入远程稿件采编系统进行操作，稿件全文应采用 word97 版以上格式。
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首页>中国骨与关节杂志
- 杂志名称：中国骨与关节杂志
- 主管单位：国家卫生和计划生育委员会
- 主办单位：中国医疗保健国际交流促进会，北京中科康辰骨关节伤病研究所
- 国际刊号：2095-252X
- 国内刊号：10-1022/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：上海图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 知网收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 维普收录(中)
动态模板PCR合成分泌性降钙素基因及其克隆
王秀利；王义生
关键词：降钙素, 聚合酶链反应, 基因, 克隆
摘要：目的用动态模板PCR基因合成法合成与克隆含人胰岛素分泌信号的人降钙素(humancalcitonin hCT)基因并经序列分析予以确证.方法根据Genebank的人胰岛素分泌信号和人的hCT基因的序列,将其分成6个片断合成单链寡核苷酸作为PCR的引物和cDNA合成的模板.其中,在互相邻近的每两条引物之间均有19～20个碱基互补,6条合成的单链寡核苷酸在PCR反应中相邻的两条单链寡核苷酸互为引物和模板,经过3个PCR循环,直接扩增出人胰岛素和降钙素的编码序列,经过25～30循环,获得足量的PCR产物,即含人胰岛素分泌信号的hCT基因.采用琼脂糖凝胶回收法,回收目的片段胰岛素分泌信号和hCT基因全长DNA.纯化后,将此段DNA插入到克隆载体PMD 18-T载体上.转化用CaCl2法制备的感受态细菌JM109,恒温震荡培养箱培养1h后,涂在含氨苄青霉素和X-gal的LB固体培养基上培养.利用氨苄抗性筛选和蓝白斑筛选实验,筛选出阳性克隆,用碱裂解法提取质粒,应用双酶切和DNA测序鉴定重组质粒.结果经动态模板PCR基因合成法合成获得212bp产物,经酶切鉴定和DNA测序确定所合成片断为胰岛素分泌信号和hCT基因全长,证明克隆到的含人胰岛素分泌信号和降钙素的基因为编码人胰岛素分泌信号和人降钙素的全长DNA序列.结论本研究为基因合成提供了一种新的可靠的方法,成功地克隆了含人胰岛素分泌信号的人降钙素基因,为人降钙素基因与后续研究提供了新的研究方法.
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